商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人胃癌成纖維細胞

組織來源 胃癌組織

產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人胃癌成纖維細胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居首，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境（Tumor mircoenvironment）的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內皮細胞，間充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介 實驗室分離的人胃癌成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人胃癌成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人胃癌組織成纖維細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 成纖維細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

原代細胞培養(yǎng)步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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