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神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)

（一）細(xì)胞系選材常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過(guò)也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高，顆粒細(xì)胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。（二）取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...

巨核細(xì)胞基本生理功能分析

巨核細(xì)胞株雖然在骨髓的造血細(xì)胞中為數(shù)zui少，僅占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.05%，但其產(chǎn)生的血小板卻對(duì)機(jī)體的止血功能極為重要。每個(gè)巨核細(xì)胞均可產(chǎn)生1000-6000個(gè)血小板。生成血小板的巨核細(xì)胞也是從骨髓中的造血干細(xì)胞分化發(fā)展來(lái)的。造血干細(xì)胞首先分化生成巨核系祖細(xì)胞，也稱巨核系集落形成單位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖細(xì)胞階段的細(xì)胞核內(nèi)的染色體一般是2-3倍體。當(dāng)祖細(xì)胞是2倍體或4倍體時(shí)，細(xì)胞具有增殖能力，因此這是巨核細(xì)胞...

原代細(xì)胞核的分離提取

(一)原代細(xì)胞操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結(jié)締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，...

程序降溫盒提高細(xì)胞凍存的存活率的方法

1.細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來(lái)用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯(cuò)的。2.異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服...

原代細(xì)胞培養(yǎng)玻璃器皿的清洗

①原代細(xì)胞浸泡：新購(gòu)進(jìn)的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來(lái)水浸泡、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min，水洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進(jìn)行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會(huì)損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢(shì)，所以易選用軟毛...

原代細(xì)胞線粒體膜勢(shì)能的檢測(cè)

原代細(xì)胞線粒體在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著樞紐作用，多種細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中zui早發(fā)生的事件，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽(yáng)離子熒光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...

哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理分析

細(xì)胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因轉(zhuǎn)錄裝置的核心位置，編碼蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄受到RNA聚合酶的調(diào)控。RNA聚合酶解開(kāi)DNA雙鏈，沿著一條鏈移動(dòng)。在移動(dòng)過(guò)程中，它們一邊“解讀”DNA鏈上的核苷，一邊合成一條相應(yīng)的RNA鏈。由PolII合成的RNA就是mRNA，它們將合成蛋白質(zhì)的指令傳給核糖體。過(guò)往的研究證實(shí)，在許多哺乳動(dòng)物的多個(gè)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄時(shí)，RNAPII往往會(huì)在啟動(dòng)子附近的某些特定區(qū)域發(fā)生停頓。這種停頓往往是發(fā)生在RNAPII復(fù)合體形成和轉(zhuǎn)錄起始之后。而這...

過(guò)氧化物酶標(biāo)記測(cè)定法原理

腫瘤細(xì)胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報(bào)告酶(過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結(jié)合.在適合底物存在下,過(guò)氧化物酶可產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng),特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞,因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來(lái)源.在所有動(dòng)物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體,因而非特異性反應(yīng)很低.抗地高辛的特異性...