細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠毛囊干細胞

簡稱 HFSCs

組織來源 毛囊組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠毛囊干細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是根毛發(fā)，立毛肌的側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的個結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊干細胞是在毛囊外根鞘隆突部中的種細胞。毛囊干細胞屬于成體干細胞，在體內(nèi)處于靜止狀態(tài)，在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力。研究發(fā)現(xiàn)，毛囊干細胞具有多向分化潛能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程。毛囊干細胞和其它成體干細胞樣，具有慢周期性、未分化性、自我更新和體外增殖能力強等特點。毛囊干細胞分化經(jīng)毛囊干細胞（hair follicle stem cells, FSC）、短暫增殖細胞（transit amplifying cells, TAC）有絲分裂后分化細胞（postmitotic differentiating cells, PDC）三個階段。毛囊干細胞在光鏡下呈立方形，細胞體積小，核漿比率大，表面光滑，皺褶少，又被稱為非鋸齒形細胞，細胞體積的增大與增殖能力呈負相關(guān)。超微結(jié)構(gòu)顯示細胞表面有少許微絨毛，細胞核存在許多卷曲，染色質(zhì)彌散分布，這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細胞的特性。

方法簡介 實驗室分離的小鼠毛囊干細胞采用膠原酶-聯(lián)合消化制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的小鼠毛囊干細胞經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠毛囊干細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。