細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠表皮角質(zhì)形成細胞

組織來源 皮膚組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠表皮角質(zhì)形成細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。依據(jù)細胞的分化狀態(tài)、功能類型可以分為多種細胞類型，表皮角化上皮細胞與角質(zhì)形成細胞核心細胞群體本質(zhì)是同細胞群體，前者從“表皮屬角化復層扁平上皮"的組織屬性命名，后者從“合成角蛋白、執(zhí)行角化功能"的功能特征命名，二者均涵蓋表皮從基底層增殖細胞到角質(zhì)層終末細胞的全分化譜系，且占表皮細胞總量超90%，是表皮屏障功能的核心載體。在這分化譜系中，存在明確的階段差異：基底層細胞是角質(zhì)形成細胞的“增殖源頭"，呈柱狀、有完整活性細胞核，以K5、K14、Ki-67、干細胞標志物p63為核心，無角化相關(guān)蛋白，未啟動角化，般描述為角化形成細胞/角質(zhì)形成細胞/角化上皮細胞等；當細胞遷移至棘層中上部至顆粒層，成為“角化細胞"——這是仍含固縮細胞核（但細胞器減少）的中間活細胞，能主動合成角蛋白與絲聚蛋白前體，處于“正在角化"的執(zhí)行階段，表達切換為K1、K10為主，同時表達絲聚蛋白前體（絲聚合蛋白原，顆粒層特征）、轉(zhuǎn)酶1（TG1，促進角蛋白交聯(lián)），Ki-67陰性；終角化細胞進步退化，在角質(zhì)層形成“角質(zhì)細胞"（角質(zhì)層終末細胞），這是無細胞核、無細胞器的終末細胞，胞質(zhì)充滿交聯(lián)角蛋白纖，通過細胞間連接構(gòu)成表皮物理屏障，無核相關(guān)標志物，以終末成熟標志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）為特征，K1、K10持續(xù)存在但無活性合成功能；PCNA是增殖細胞的標志物，表皮角質(zhì)形成細胞在基底層（增殖活躍區(qū)）可能表達PCNA，而終末分化層（角質(zhì)層）可能不表達，細胞在不同增殖狀態(tài)表達量不樣；這四種細胞的核心差異在于分化階段（全階段/中間態(tài)/終末態(tài)）、形態(tài)（核與細胞器有無/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角質(zhì)形成細胞（表皮角化上皮細胞）包含角化細胞與角質(zhì)細胞"的邏輯關(guān)系。表皮也包含其他非角化上皮細胞：黑色素細胞（Melanocytes）、朗格漢斯細胞（Langerhanscells）、Merkel細胞等。

方法簡介 實驗室分離的小鼠表皮角質(zhì)形成層細胞先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的小鼠表皮角質(zhì)形成細胞經(jīng)K5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 小鼠表皮角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 上皮細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。