細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞

組織來(lái)源 腦海馬體

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離自海馬體；海馬體（Hippocampus），又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細(xì)胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對(duì)獨(dú)立分布的特點(diǎn)，境界相對(duì)清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀：ｑR神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用（細(xì)胞因子）的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、 多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液： 0.125%

兔海馬神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及???

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。