細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞

組織來源 胰腺癌組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織；胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1%，是預(yù)后差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而很低。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其發(fā)生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過量飲用咖啡、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)；近年來的調(diào)查報(bào)告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā)病率明顯高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高；另外還有許多因素與此病的發(fā)生有一定關(guān)系，如職業(yè)、環(huán)境、地理等。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤，近幾十年來，生存率得到了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，高的死亡率使其成為“癌中王"，近年來胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學(xué)者的重視。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復(fù)雜，其中，胰腺星狀細(xì)胞是胰腺癌微環(huán)境中重要的間質(zhì)細(xì)胞之一，在胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及耐藥中發(fā)揮重要的作用。因此針對(duì)胰腺星狀細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預(yù)后。胰腺星狀細(xì)胞（pancreaticstellate cells, PSC）是一種胰腺特異性間質(zhì)細(xì)胞，多在胰腺組織內(nèi)血管和導(dǎo)管周圍聚集，環(huán)繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細(xì)胞的4%左右，細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的生素A脂滴，以表達(dá)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)（glial filament acidic protein, GFAP）、結(jié)合蛋白（Desmin）為特征。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC被激活，成為一種肌成纖細(xì)胞，胞質(zhì)中富含生素A的脂滴消失，以表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）為標(biāo)志，能大量合成細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）和分泌多種細(xì)胞因子。胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。PSC通過誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞（pancreatic cancercells, PCC）上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變（epithelial-mesenchymaltransition, EMT）促進(jìn)胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達(dá)靶器官的一個(gè)多步驟過程，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT主要的特征是上皮細(xì)胞特征丟失同時(shí)伴間質(zhì)細(xì)胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白（E-cadherin）表達(dá)下降，波形蛋白（Vimentin）表達(dá)上調(diào)。karnevi等研究發(fā)現(xiàn)，PSC與PCC共培養(yǎng)后能夠誘導(dǎo)PCC上皮性細(xì)胞標(biāo)志（E-cadherin, β-catenin）丟失，促進(jìn)間質(zhì)性細(xì)胞標(biāo)志（Vimentin, Snai-1）獲得，表明PSC在PCC的EMT形成過程中發(fā)揮了重要的作用。PSC參與胰腺癌進(jìn)展的各個(gè)環(huán)節(jié)，而PSC活化是PSC發(fā)揮功能的重要部分。因此，如能抑制PSC活化或控制PSC細(xì)胞功能將為胰腺癌治療提供潛在的治療策略。因此，隨著針對(duì)抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望從胰腺癌微環(huán)境角度切實(shí)提高胰腺癌的治療效果。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。