商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞

組織來源 皮膚組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。依據(jù)細(xì)胞的分化狀態(tài)、功能類型可以分為多種細(xì)胞類型，表皮角化上皮細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞核心細(xì)胞群體本質(zhì)是同一細(xì)胞群體，前者從“表皮屬角化復(fù)層扁平上皮"的組織屬性命名，后者從“合成角蛋白、執(zhí)行角化功能"的功能特征命名，二者均涵蓋表皮從基底層增殖細(xì)胞到角質(zhì)層終末細(xì)胞的全分化譜系，且占表皮細(xì)胞總量超90%，是表皮屏障功能的核心載體。在這一分化譜系中，存在明確的階段差異：基底層細(xì)胞是角質(zhì)形成細(xì)胞的“增殖源頭"，呈柱狀、有完整活性細(xì)胞核，以K5、K14、Ki-67、干細(xì)胞標(biāo)志物p63為核心，無角化相關(guān)蛋白，未啟動(dòng)角化，一般描述為角化形成細(xì)胞/角質(zhì)形成細(xì)胞/角化上皮細(xì)胞等；當(dāng)細(xì)胞遷移至棘層中上部至顆粒層，成為“角化細(xì)胞"——這是仍含固縮細(xì)胞核（但細(xì)胞器減少）的中間活細(xì)胞，能主動(dòng)合成角蛋白與絲聚蛋白前體，處于“正在角化"的執(zhí)行階段，表達(dá)切換為K1、K10為主，同時(shí)表達(dá)絲聚蛋白前體（絲聚合蛋白原，顆粒層特征）、轉(zhuǎn)酶1（TG1，促進(jìn)角蛋白交聯(lián)），Ki-67陰性；終角化細(xì)胞進(jìn)一步退化，在角質(zhì)層形成“角質(zhì)細(xì)胞"（角質(zhì)層終末細(xì)胞），這是無細(xì)胞核、無細(xì)胞器的終末細(xì)胞，胞質(zhì)充滿交聯(lián)角蛋白纖維，通過細(xì)胞間連接構(gòu)成表皮物理屏障，無核相關(guān)標(biāo)志物，以終末成熟標(biāo)志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）為特征，K1、K10持續(xù)存在但無活性合成功能；PCNA是增殖細(xì)胞的標(biāo)志物，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在基底層（增殖活躍區(qū)）可能表達(dá)PCNA，而終末分化層（角質(zhì)層）可能不表達(dá)，細(xì)胞在不同增殖狀態(tài)表達(dá)量不一樣；這四種細(xì)胞的核心差異在于分化階段（全階段/中間態(tài)/終末態(tài)）、形態(tài)（核與細(xì)胞器有無/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角質(zhì)形成細(xì)胞（表皮角化上皮細(xì)胞）包含角化細(xì)胞與角質(zhì)細(xì)胞"的邏輯關(guān)系。表皮也包含其他非角化上皮細(xì)胞：黑色素細(xì)胞（Melanocytes）、朗格漢斯細(xì)胞（Langerhanscells）、Merkel細(xì)胞等。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞采用先機(jī)械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)K5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液：0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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