商品屬性：

產(chǎn)品名稱 大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞

組織來源 肺組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動具有重要意義。

方法簡介 實驗室分離的大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）或明膠包被液（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基： 大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞 培養(yǎng)基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 內(nèi)皮細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

原代細胞培養(yǎng)步驟：

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取材與預(yù)處理?：取新生24小時內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液?。

培養(yǎng)方法?：

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原代細胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細胞死亡。

?細胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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