PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】伯克氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
【英文名稱】Burkholderia spp.
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6491
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
伯克氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
Lelystad Virus(LV)探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，菌體球狀，鏈狀排列，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生乳酸。發(fā)酵乳制品用菌

Lentivirus通用RT-PCR試劑盒模式菌株分類嗜鹽古菌。模式菌株

Lentivirus通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒模式菌株分類嗜鹽古菌。模式菌株

Lentivirus通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒模式菌株分類嗜鹽古菌。模式菌株

Leptospira interrogans問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體PCR試劑盒模式菌株分類嗜鹽古菌。模式菌株

Leptospira interrogans問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leptospira interrogans問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，單極毛運(yùn)動(dòng)，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leptospira spp.鉤端螺旋體通用PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leptospira spp.鉤端螺旋體通用染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，菌體桿狀，嚴(yán)格好氧；嗜堿細(xì)菌。模式菌株

Leptospira spp.鉤端螺旋體通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leucocytozoon caulleryi卡氏住白細(xì)胞原蟲PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，化能異養(yǎng)，呼吸代謝。

Leucocytozoon caulleryi卡氏住白細(xì)胞原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leucocytozoon caulleryi卡氏住白細(xì)胞原蟲探針?lè)晒舛縋CR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Leucocytozoon sabrezis沙氏住白細(xì)胞原蟲PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，化能異養(yǎng)，呼吸代謝。模式菌株

Leucocytozoon sabrezis沙氏住白細(xì)胞原蟲染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。
伯克氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒色素框同源物3小鼠單克隆抗體(3B9)　HP-1γ Mouse Monoclonal Antibody(3B9)

色素框同源物3小鼠單克隆抗體(2F5)　HP-1γ Mouse Monoclonal Antibody(2F5)

色氨酰tRNA合成酶2　SYWM Polyclonal Antibody

三葉因子1　pS2 Polyclonal Antibody

三葉形因子2　TFF2 Polyclonal Antibody

三肽基肽酶Ⅰ　TPP1 Polyclonal Antibody

三羥基*基輔酶A合成酶1　HMCS1 Polyclonal Antibody

三磷酸腺苷受體受體P2Y6　P2RY6 Polyclonal Antibody

三磷酸腺苷受體受體P2Y2　P2RY2 Polyclonal Antibody