實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、腸粘附性大腸桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：腸粘附性大腸桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
英文名稱：Enteroadhesive E.Coli(EAEC)
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針?lè)晒舛勘Ｊ匦蛄性O(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)馬皰疹病毒4型LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞球狀、短桿狀，好氧，呼吸代謝。模式菌株

Equine Herpesvirus(EHV)馬皰疹病毒通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，菌體桿狀，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產(chǎn)生乳酸。

Equine Infectious Anemia Virus(EIAV)馬傳染性貧血病毒RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，形成芽孢。

Equine Influenza Virus(EIV)馬流感病毒H3N8亞型RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，形成芽孢。

Equine Papilloma Virus(EPV)馬乳頭瘤病毒LAMP試劑盒模式菌株分類嗜鹽堿古菌。模式種；模式菌株

Equine Rhinitis Virus馬鼻炎病毒LAMP試劑盒模式菌株分類嗜鹽堿古菌。模式菌株

Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)馬鼻肺炎病毒LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，植物病原菌。

Equine Rotavirus馬輪狀病毒RT-LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，植物病原菌。

Equine Viral Arteritis Virus馬病毒性動(dòng)脈炎病毒RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。

Erlichia sennetsu腺熱埃里希體LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，化能異養(yǎng)，發(fā)酵代謝。模式菌株

Erysipelothrix rhusiopathiae紅斑丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，嗜堿細(xì)菌。

Erysipelothrix spp丹毒絲菌屬通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格好氧，呼吸代謝。異養(yǎng)硝化

ESBL-Escherichia coli超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌（大腸埃希氏菌）LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格好氧，呼吸代謝。芳烴降解

ESBL-Klebsiella pneumoniae超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格好氧，呼吸代謝。異養(yǎng)硝化

Escherichia spp.埃希氏菌通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，菌體細(xì)桿狀；好氧，呼吸代謝為主。亞硝化
腸粘附性大腸桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒白血病相關(guān)蛋白7　DLEU7 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞衍生趨化因子2　LECT2 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞衍生趨化因子1　LECT1 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體6　LIRA1 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體3　LIRB3 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞酪氨酸激酶1　LTK Polyclonal Antibody

白細(xì)胞介素增強(qiáng)子結(jié)合因子2　ILF2 Polyclonal Antibody

白細(xì)胞介素27受體α　I27RA Polyclonal Antibody

白細(xì)胞介素22受體α2　I22R2 Polyclonal Antibody
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好。