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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡介

牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

更新時(shí)間:2020-09-29
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:438
產(chǎn)品型號:50T
詳細(xì)介紹在線留言

實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由
(1)高溫變性模板;
(2)引物與模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
【產(chǎn)品名稱】牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma bovis
【產(chǎn)品編號】YSP6970
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測,所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀,可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板,擴(kuò)增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng),擴(kuò)增效率更高。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
Rutin張力蛋白4檢測試劑盒20mg

酚-3-葡萄糖鼠李糖苷 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人視黃醇結(jié)合蛋白1(RBP1)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)ELISA試劑盒,英文名:TNFSF12 ELISA Kit

MatrineALPHA-乳白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人腺苷蛋氨脫羧酶(AMD1)Polyclonal Antibody 0.2ml

人FMS樣酪氨激酶3(FLT3)HAGHL  羥基酰谷胱甘肽水解酶樣蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAlprazolam Related Compound A規(guī)格:200mgCD38分子檢測試盒20mg人肝癌細(xì)胞,Bel7405細(xì)胞1x10^6cells

Astilbin真核起始因子4A  II檢測試劑盒20mg

鈣;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 訂購|咨詢 規(guī)格: 0.1g 成蛋白相關(guān)蛋白1抗體 TOR2A ELISA Kit 耐扭蛋白2A(TOR2A)ELISA試劑盒

Oxymatrine鹽阿法羅定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人γ-分泌酶(γ-secretase/GACE)Polyclonal Antibody 0.2ml

人TRAILHEATR7B2  熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體規(guī)格:96T/48TAlprostadil規(guī)格:20mgCD3分子檢測試盒20mg人肝癌細(xì)胞,Hep G2細(xì)胞1x10^6cells

98%100g50g性酶(ALP)檢測試劑盒(二鈉比色法)Prepro adrenomedullin

硬脂(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) Stearic acid

Rabbit Antihorse IgG Whole serum  兔抗馬IgG抗血清進(jìn)口、分裝亞鐵螯合酶檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4836139

98%5g10g性酶(ALP)檢測試劑盒(二鈉比色法)Actin IgA

 大鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Rabbit AntiHRP Whole serum  兔抗HRP抗血清進(jìn)口、原裝ABO組織血型系統(tǒng)轉(zhuǎn)移酶檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4836139

98%1g500g性酶(ALP)檢測試劑盒(二鈉比色法)tissue transglutaminase

L-山梨糖(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 L-(-)-Sorbose

Vitamin PP Assay Broth250精氨酶檢測試盒5mg睪檢測試盒argininevasopressin
牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒茶堿 ;Theophylline CAS號: 58559 規(guī)格: 100mg 訂購|咨詢

刺五加葉中;Hederasaponin CAS號: 36284772 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

長梗冬青苷;Pedunculoside CAS號: 42719324 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

重樓皂苷Ⅶ;Polyphyllin VI CAS號: 76296758 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

重樓皂苷Ⅵ;Polyphyllin VI CAS號: 55916513 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

重樓皂苷II;Chonglou Sapo CAS號: 76296725 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

重樓皂苷I;Chonglou Sapon CAS號: 50773416 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

粗莖頭堿;Crassicauline CAS號: 79592919 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅳ;Orange IV CAS號: 554734 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅱ;Orange Ⅱ CAS號: 633965 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅰ;Orange I CAS號: 523444 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

α常春藤皂苷;AHederin CAS號: 35790955 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

蟲草素;Cordycepin CAS號: 73030 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

常春藤皂苷元;Hederagenin CAS號: 465996 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

蟾毒靈;Bufalin CAS號: 465214 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

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