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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

更新時(shí)間:2020-09-29
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:378
產(chǎn)品型號(hào):50T
詳細(xì)介紹在線留言

【產(chǎn)品名稱】波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Ostertagia podjapolskyi
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP7035
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè),所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀,可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板,擴(kuò)增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng),擴(kuò)增效率更高。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由
(1)高溫變性模板;
(2)引物與模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
Bilobalide抑制素B檢測(cè)試劑盒20mg

蒼術(shù)素;Atractylodin 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞英文名稱:DCS

GinkgolideB穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)CLIA試劑盒 0.2ml

human similar to RIKEN cDNA 2010K09 gene ELISA KIT  人類似RIKEN cDNA 2010K09 基CAS號(hào):10488365 抗氧化酶檢測(cè)試盒1mgHuman/人Elisa試盒30925189

GinkgolideC抑制素βA檢測(cè)試劑盒20mg

蘆薈苷(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Aloin 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeBT-474(人腺導(dǎo)管細(xì)胞)

GinkgolideC穿心蓮提取物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:規(guī)格:人自身免疫調(diào)節(jié)因子(Autoimmune regulator)ELISA試劑盒 0.2ml

RHOB(Human ras homolog gene family,memmber B) ELISA Kit  人ras同源物基家族成員bCAS號(hào):104872062 法尼基焦合酶檢測(cè)試盒5mgHuman/人Elisa試盒30925189

PI染色液5mg

 CDC厭氧菌瓊脂/CDC Anaerobic Agar用于厭氧菌的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

Fetal bovine serum(Defined FBS) BR蛋白酪氨酶1B檢測(cè)試盒20mg雌二醇檢測(cè)試盒ThyroidStimulatingHormone

97%5g100mlβ淀粉酶Lactate Dehydrogenase 3

2-乙基-1,3-己二醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 2-Ethyl-1,3-hexanediol

T2素檢測(cè)試盒20mg促狀腺激素檢測(cè)試盒folliclestimulatinghormone

97%25g5gβ淀粉酶Lactate Dehydrogenase 2

 胎兒表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

New born calf serumBR結(jié)核分枝桿菌Y干擾素檢測(cè)試盒20mg促卵泡素檢測(cè)試盒corticotropinreleasinghormone
波氏奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒臭椿 CAS號(hào): 981157 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

茶多 CAS號(hào): 84650602 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅳ CAS號(hào): 554734 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅱ CAS號(hào): 633965 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

橙黃Ⅰ CAS號(hào): 523444 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

雌 CAS號(hào): 53167 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

穿琥寧 CAS號(hào):  規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白果雙黃 CAS號(hào): 521324 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

3表熊果 CAS號(hào): 989300 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

()白雀木 CAS號(hào): 642386 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

八姜黃素 CAS號(hào): 36062074 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白楊素7葡萄糖醛苷 CAS號(hào):  規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

半齒澤蘭素 CAS號(hào): 855969 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

并黃素 CAS號(hào): 604591 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

巴馬亭紅堿 CAS號(hào): 16176684 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為:待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

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